Механизм интериоризации: Интериоризация: примеры механизма, этапы, применение

Интериоризация: примеры механизма, этапы, применение

Интериоризацией называется переход от внешнего к внутреннему. Экстериоризация является противоположным действием. С помощью интериоризации происходит обучение человека, когда взрослые сразу рассказывают и показывают, а затем дети это повторяют, делая перенос необходимого вовнутрь.

Содержание:

  • 1 Что такое интериоризация?
  • 2 Механизм интериоризации
  • 3 Методы изучения
  • 4 Пример интериоризации в области психологии


Что такое интериоризация?

Впервые об этом понятии стало известно от французского ученого, однако, российский ученый Выготский работал над вопросом более подробно. Определение «интериоризация» является процессом, когда благодаря жизненному опыту человека формируются его психические структуры. В педагогике интериоризацией называют обучение ребенка, направленное на умение общаться с символами.

Механизм интериоризации

Ученый П. Я. Гальперин считает, что механизм интериоризации характеризуется шестью этапами:

  1. Для первого этапа характерной является мотивация или призыв со стороны взрослого.
  2. На втором этапе происходит ориентировочный момент, когда ребенок наблюдает за действием взрослого и анализирует его.
  3. Третий этап — материальный, когда малыш сам повторяет действия.
  4. На четвертом этапе ребенок уже проговаривает действия вслух.
  5. На пятом этапе происходит внутренняя речь, когда ребенок проговаривает действия про себя.
  6. Этап умственного действия отмечается уже шестым, когда весь мыслительный процесс у ребенка происходит с высокой скоростью

Наиболее часто интериоризовать приходится в процессе обучения, когда педагогу необходимо донести до ребенка новый материал и научить его выполнять различные действия в уме. Не обошел интериоризированный процесс и воспитательный момент, когда у ребенка в уме формируется понятие о нормах поведения. Во взрослом возрасте данный процесс может использоваться в отношениях начальника и подчиненного, а также стажера и его наставника.

Методы изучения

Интериоризировать можно с помощью различных методов в психологии и социологии:

  • с помощью наблюдения;
  • естественного эксперимента;
  • тестирования;
  • беседы.

К основным проблемам данного процесса относятся какие-либо отклонения в психическом и физиологическом плане и поиск объективных исследовательских методик в области психологии.

Пример интериоризации в области психологии

Очень четко отражение интериоризации можно прослеживать на примере игры ребенка с сортером. Сразу взрослый проговаривает малышу, что квадратик необходимо разместить в квадратном отверстии, а затем малыш уже начинает сам проговаривать этап игры. В дальнейшем он начинает делать это осмысленно, а в конце уже успешно подбирает фигурки, соответствующие размеру, без каких-либо раздумий.

Процесс интериоризации имеет особую ценность, так как позволяет ребенку научиться анализировать свои действия, сравнивать, а также считать.

Умственные действия положительно влияют на развитие и способствуют повышению скорости действий.

В процессе интериоризации большую роль играет эмоциональное состояние обучающего. Он должен уметь управлять своими эмоциями. Научиться этому можно с помощью курса Викиум «Эмоциональный интеллект».

Интериоризация — что это такое в психологии и педагогике

Интериоризация – это процесс перехода от внешних действий к внутренним. На нем строится обучение и воспитание человека: сначала взрослые объясняют и показывают, а потом дети, повторяя, переносят необходимые действия во внутренний план.

Содержание

  • История открытия и изучения
  • Что такое интериоризация
    • В психологии
    • В педагогике
  • Этапы интериоризации
  • Механизм интериоризации
  • Сферы применения
  • Методы изучения
  • Проблематика
  • Пример интериоризации в психологии
  • Заключение

История открытия и изучения

Изначально понятие «интериоризация» было введено исследователями социологической школы во Франции. У него была тесная связь с социализацией.

Л.С. Выготский работал над теорией интериоризации более подробно, благодаря чему она получила принципиальное значение в педагогике и психологии.

Что такое интериоризация

Интериоризация – это процесс формирования психических структур человека посредством приобретения жизненного опыта. В переводе с латинского языка это слово означает переход от внешнего к внутреннему, то есть в процессе интериоризации внешняя деятельность постепенно переходит в мысленные операции.

В психологии

Интериоризация в психологии определяется кратко как процесс формирования психических процессов посредством усвоения внешней деятельности, которая принята в социуме.

В педагогике

В педагогике интериоризация, простыми словами, – это процесс формирования у ребенка способности обращаться с символами. То есть сначала ребенок выполняет внешнюю деятельность, а со временем она «сворачивается» и становится все более символичной. В теории воспитания чаще всего говорят об этапах интериоризации ценностных ориентиров.

Этапы интериоризации

На первом этапе взрослый воздействует на ребенка словом, побуждая его к деятельности. Например, говорит ему: «давай, соберем пирамидку».

На втором – малыш осваивает способ обращения к себе, пытается сам на себя воздействовать с помощью слов и выполняет действие. Он может обратиться к себе сам: «Миша, давай соберем пирамидку?», и после этого начинает деятельность.

На третьем этапе ребенок уже уверенно воздействует словом сам на себя, причем делает это уже в уме, а не вслух.

Последовательность этапов интериоризации ценностных ориентиров точно такие же: сначала взрослый сообщает о правильности того или иного поступка, затем ребенок проговаривает его вслух, и, в конечном итоге, усваивает на мыслительном уровне.

Механизм интериоризации

Механизм интериоризации или преобразования действий, по мнению П.Я. Гальперина, включает в себя 6 этапов.

На первом этапе включается мотивационный компонент, лучше всего, если это будет проявление естественного познавательного интереса. Но здесь может быть и призыв взрослого к деятельности, например: «Сегодня мы будем учиться складывать предметы».

На втором этапе – ориентировочный компонент. Малыш наблюдает за тем, как взрослый добавляет к двум кубикам один и получает три.

Третий этап – материальный. Ребенок берет предметы и сам их складывает.

Четвертый – этап внешней речи. Ребенок уже без предметов может проговорить: «Если к двум прибавить три, то будет пять».

Пятый – этап внутренней речи. Малыш проговаривает про себя фразу целиком: «Если к одному прибавить три, то будет четыре».

Шестой – этап умственного действия. Речь сворачивается и мыслительное действие выполняется с очень высокой скоростью, то есть ребенок учится считать в уме.

Сферы применения

Наиболее часто интериоризация используется в образовательном процессе, когда педагогу необходимо научить ребенка выполнять различные умственные действия. Также она используется в процессе воспитания: у ребенка формируются умственные действия относительно правильного поведения в обществе.

Во взрослой жизни интериоризация также может быть использована в отношениях между начальником и подчиненным или между наставником и стажером.

Методы изучения

Процесс интериоризации может изучаться с помощью различных методов психологии:

  • наблюдение;
  • естественный эксперимент;
  • тестирование;
  • беседа.

Проблематика

К проблематике интериоризации относится:

  • отклонения в психофизиологическом плане;
  • социальная детерминация человеческой психики;
  • подбор объективных методов исследования в психологии.

Пример интериоризации в психологии

Процесс интериоризации в психологии можно ярко увидеть на примере малыша, который собирает сортер. Сначала взрослый ему показывает и говорит: «Круглую фигурку — в круглую дырочку, звездочку – в звездочку». Дальше малыш проговаривает сам для себя вслух то же самое и выполняет действие. На следующем этапе он проговаривает необходимые действия только мысленно. На последнем этапе он быстро соотносит фигурки с отверстиями и успешно выполняет действия с высокой скоростью, не раздумывая, и без ошибок.

Заключение

Процесс интериоризации позволяет ребенку научиться выполнять необходимую деятельность мысленно: считать, читать, сравнивать, классифицировать, анализировать. Переход к умственным действиям значительно повышает скорость выполнения действий сравнительно с внешними действиями и речью.

Механизмы интернализации проникающих в клетку пептидов

1. Madani F, Lindberg S, Langel Ü, Futaki S, Gräslund A. J Biophys. 2011: 1–10. doi: 10.1155/2011/414729. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Guo Z, Peng H, Kang J, Sun D. Biomed Rep. 2016; 4: 528–534. doi: 10.3892/br.2016.639. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Heitz F, Morris MC, Divita G. Br J Pharmacol. 2009;157(2):195–206. doi: 10.1111/j.1476-5381.2009.00057.х. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Lönn P, Dowdy S F. Экспертное мнение о доставке лекарств. 2015;12:1627–1636. doi: 10.1517/17425247.2015.1046431. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Reissmann S. J Pept Sci. 2014;20:760–784. doi: 10.1002/psc.2672. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

6. Сильва С., Алмейда А.Дж., Вейл Н. Биомолекулы. 2019;9:22. doi: 10.3390/biom

22. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

7. Wang F, Wang Y, Zhang X, Zhang W, Guo S, Jin F. J. Контролируемый выпуск. 2014; 174:126–136. doi: 10.1016/j.jconrel. 2013.11.020. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

8. Чжан Д., Ван Дж., Сюй Д. Дж. Контролируемое высвобождение. 2016; 229:130–139. doi: 10.1016/j.jconrel.2016.03.020. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

9. Frankel AD, Pabo C O. Cell. 1988; 55: 1189–1193. doi: 10.1016/0092-8674(88)

-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

10. Munyendo W L, Lv H, Benza-Ingoula H, Baraza LD, Zhou J. Биомолекулы. 2012;2(2):187–202. doi: 10.3390/biom2020187. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Deshayes S, Morris MC, Divita G, Heitz F. Cell Mol Life Sci. 2005;62:1839–1849. doi: 10.1007/s00018-005-5109-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. McClorey G, Banerjee S. Biomedicines. 2018; 6:1–15. doi: 10.3390/biomedics6020051. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

13. Tai W, Gao X. Adv Drug Delivery Rev. 2017;110-111:157–168. doi: 10.1016/j.addr.2016.08.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Devaraj N K. ACS Cent Sci. 2018; 4: 952–959. doi: 10.1021/acscentsci.8b00251. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Field L.D., Delehanty J.B., Chen Y., Medintz I.L. Acc Chem Res. 2015;48:1380–1390. doi: 10.1021/ar500449v. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

16. Sapsford KE, Tyner KM, Dair BJ, Deschamps JR, Medintz IL. Anal Chem (Вашингтон, округ Колумбия, США) 2011;83(12):4453–4488. doi: 10.1021/ac200853a. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

17. Meade BR, Dowdy SF. Adv Drug Delivery Rev. 2008;60(4-5):530–536. doi: 10.1016/j.addr.2007.10.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

18. Муратовская А., Экклс М. Р. FEBS Lett. 2004; 558: 63–68. doi: 10.1016/s0014-5793(03)01505-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

19. Chiu Y-L, Ali A, Chu C-y, Cao H, Rana T M. Chem Biol. 2004;11(8):1165–1175. doi: 10.1016/j.chembiol.2004.06.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

20. EL Andaloussi S, Lehto T, Mäger I, Rosenthal-Aizman K, Oprea I I, Simonson O E, Sork H, Ezzat K, Copolovici DM, Kurrikoff K, et al. Нуклеиновые Кислоты Res. 2011;39(9):3972–3987. дои: 10.1093/нар/gkq1299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

21. Ruczynski J, Wierzbicki PM, Kogut-Wierzbicka M, Mucha P, Siedlecka-Kroplewska K, Rekowski P. Folia Histochem Cytobiol. 2014; 52: 257–269. doi: 10.5603/fhc.a2014.0034. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Pae J, Säälik P, Liivamägi L, Lubenets D, Arukuusk P, Langel Ü, Pooga M. J. Controlled Release. 2014; 192:103–113. doi: 10.1016/j.jconrel.2014.07.002. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

23. Trabulo S, Cardoso A L, Mano M, De Lima M C P. Pharmaceuticals. 2010;3(4):961–993. doi: 10.3390/ph4040961. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

24. Derossi D, Chassaing G, Prochiantz A. Trends Cell Biol. 1998; 8: 84–87. doi: 10.1016/s0962-8924(98)80017-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

25. Maniti O, Alves I, Trugnan G, Ayala-Sanmartin J. PLoS One. 2010;5(12):e15819. doi: 10.1371/journal. pone.0015819. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

26. Алвес И. Д., Цзяо С.-И., Обри С., Аусседа Б., Бурлина Ф., Чессейнг Г., Саган С. Biochim Biophys Acta, Biomembr. 2010;1798(12):2231–2239. doi: 10.1016/j.bbamem.2010.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

27. Кополовичи Д М, Лангель К, Эристе Э, Лангель Ю. АКС Нано. 2014;8(3):1972–1994. doi: 10.1021/nn4057269. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

28. Bechara C, Sagan S. FEBS Lett. 2013;587(12):1693–1702. doi: 10.1016/j.febslet.2013.04.031. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

29. Deshayes S, Morris MC, Divita G, Heitz F. Biochim Biophys Acta, Biomembr. 2006;1758(3):328–335. doi: 10.1016/j.bbamem.2005.10.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

30. Deshayes S, Heitz A, Morris MC, Charnet P, Divita G, Heitz F. Биохимия. 2004;43(6):1449–1457. doi: 10.1021/bi035682s. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

31. Simeoni F, Morris MC, Heitz F, Divita G. Nucleic Acids Res. 2003; 31: 2717–2724. doi: 10.1093/nar/gkg385. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

32. Gerbal-Chaloin S, Gondeau C, Aldrian-Herrada G, Heitz F, Gauthier-Rouvière C, Divita G. Biol Cell. 2007;99(4):223–238. doi: 10.1042/bc20060123. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

33. Deshayes S, Gerbal-Chaloin S, Morris MC, Aldrian-Herrada G, Charnet P, Divita G, Heitz F. Biochim Biophys Acta, Biomembr. 2004;1667(2):141–147. doi: 10.1016/j.bbamem.2004.09.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

34. Pouny Y, Rapaport D, Mor A, Nicolas P, Shai Y. Биохимия. 1992;31:12416–12423. doi: 10.1021/bi00164a017. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

35. Mudhakir D, Harashima H. ​​AAPS J. 2009; 11: 65–77. doi: 10.1208/s12248-009-9080-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

36. Людтке С., Хе К., Хуанг Х. Биохимия. 1995; 34: 16764–16769. doi: 10.1021/bi00051a026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

37. Shin M C, Zhang J, Min K A, Lee K, Byun Y, David A E, He H, Yang V C. J Biomed Mater Res, Part A. 2014; 102 (2): 575–587. дои: 10.1002/jbm.a.34859. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

38. Richard J P, Melikov K, Vives E, Ramos C, Verbeure B, Gait M J, Chernomordik L V, Lebleu B. J Biol Chem. 2003; 278: 585–590. doi: 10.1074/jbc.m209548200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

39. Schmidt N, Mishra A, Lai G H, Wong G C L. FEBS Lett. 2010; 584:1806–1813. doi: 10.1016/j.febslet.2009.11.046. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

40. Ter-Avetisyan G, Tünnemann G, Nowak D, Nitschke M, Herrmann A, Drab M, Cardoso M C. J Biol Chem. 2009 г.;284(6):3370–3378. doi: 10.1074/jbc.m805550200. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

41. Fretz M M, Penning N A, Al-Taei S, Futaki S, Takeuchi T, Nakase I, Storm G, Jones AT. Biochem J. 2007 ;403:335–342. doi: 10.1042/bj20061808. [PMC бесплатная статья] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

42. Wallbrecher R, Ackels T, Olea RA, Klein M J, Caillon L, Schiller J, Bovée-Geurts PH, van Kuppevelt TH, Ulrich A S, Spehr М и др. J Контролируемое высвобождение. 2017; 256:68–78. doi: 10.1016/j.jconrel.2017.04.013. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

43. Сакаи Н., Футаки С., Матиле С. Мягкая материя. 2006; 2: 636–641. doi: 10.1039/b606955j. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

44. Futaki S, Nakase I. Acc Chem Res. 2017;50:2449–2456. doi: 10.1021/acs.accounts.7b00221. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

45. Hirose H, Takeuchi T, Osakada H, Pujals S, Katayama S, Nakase I, Kobayashi S, Haraguchi T, Futaki S. Mol Ther. 2012;20:984–993. doi: 10.1038/mt.2011.313. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

46. Циглер А., Нерви П., Дюрренбергер М., Силиг Дж. Биохимия. 2005; 44: 138–148. doi: 10.1021/bi0491604. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

47. Herce HD, Garcia AE. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:20805–20810. doi: 10.1073/pnas.0706574105. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

48. Herce HD, Garcia AE, Litt J, Kane RS, Martin P, Enrique N, Rebolledo A, Milesi V. Biophys J. 2009; 97: 1917–1925 гг. doi: 10.1016/j.bpj.2009.05.066. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

49. Li Z-l, Ding H-m, Ma Y-q. Мягкая материя. 2013;9(4):1281–1286. doi: 10.1039/c2sm26519b. [CrossRef] [Google Scholar]

50. Hu J-m, Tian W-d, Ma Y-q. Макромоль Теория Simul. 2015;24(4):399–406. doi: 10.1002/mats.201500023. [CrossRef] [Google Scholar]

51. Zhao F, Zhao Y, Liu Y, Chang X, Chen C, Zhao Y. Small. 2011;7:1322–1337. doi: 10.1002/smll.201100001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

52. Коннер С. Д., Шмид С. Л. Природа. 2003; 422:37–44. doi: 10.1038/nature01451. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

53. Chou LY T, Ming K, Chan W CW. Chem Soc Rev. 2011;40(1):233–245. doi: 10.1039/c0cs00003e. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

54. Нел А. Е., Мэдлер Л., Велегол Д., Ся Т., Хоек Э. М. В., Сомасундаран П., Клаессиг Ф., Кастранова В., Томпсон М. Nat Mater. 2009;8(7):543–557. doi: 10.1038/nmat2442. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

55. Nakase I, Niwa M, Takeuchi T, Sonomura K, Kawabata N, Koike Y, Takehashi M, Tanaka S, Ueda K, Simpson J C, et al. Мол Тер. 2004;10(6):1011–1022. doi: 10.1016/j.ymthe.2004.08.010. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

56. Каплан И. М., Вадиа Дж. С., Дауди С. Ф. Дж. Контролируемый выпуск. 2005; 102: 247–253. doi: 10.1016/j.jconrel.2004.10.018. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

57. Есилевский С., Марринк С.-Дж., Марк А. Е. Biophys J. 2009;97(1):40–49. doi: 10.1016/j.bpj.2009.03.059. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

58. Nakase I, Akita H, Kogure K, Gräslund A, Langel Ü, Harashima H, Futaki S. Acc Chem Res. 2012;45:1132–1139. doi: 10.1021/ar200256e. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

59. Фархани С.М., Джохари-ахар М., Закери-Милани П., Шахбази Моджаррад Дж., Вализаде Х. Артиф Клетки, Наномед, Биотехнология. 2015: 1–5. doi: 10.3109/21691401.2015.1031906. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

60. Wadia J S, Stan RV, Dowdy S F. Nat Med. 2004;10(3):310–315. doi: 10.1038/nm996. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

61. Futaki S, Nakase I, Tadokoro A, Takeuchi T, Jones A T. Biochem Soc Trans. 2007;35(4):784–787. doi: 10.1042/bst0350784. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

62. Jones A T. J Cell Mol Med. 2007;11(4):670–684. doi: 10.1111/j.1582-4934.2007.00062.x. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

63. Lim J P, Gleeson PA. Immunol Cell Biol. 2011;89(8):836–843. doi: 10.1038/icb.2011.20. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

64. Swanson J A, Watts C. Trends Cell Biol. 1995;5(11):424–428. doi: 10.1016/s0962-8924(00)89101-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

65. Nakase I, Hirose H, Tanaka G, Tadokoro A, Kobayashi S, Takeuchi T, Futaki S. Mol Ther. 2009 г.;17:1868–1876. doi: 10.1038/mt.2009.192. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

66. Танака Г., Накасе И., Фукуда Ю., Масуда Р., Оиси С., Шимура К., Кавагути Ю., Такатани-Накасе Т. , Лангель Ю., Грэслунд А. , и другие. хим. биол. 2012;19:1437–1446. doi: 10.1016/j.chembiol.2012.09.011. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

67. Duchardt F, Fotin-Mleczek M, Schwarz H, Fischer R, Brock R. Traffic. 2007; 8: 848–866. doi: 10.1111/j.1600-0854.2007.00572.x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

68. Walrant A, Cardon S, Burlina F, Sagan S. Acc Chem Res. 2017;50(12):2968–2975. doi: 10.1021/acs.accounts.7b00455. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

69. Boisguérin P, Deshayes S, Gait M J, O’Donovan L, Godfrey C, Betts CA, Wood M J A, Lebleu B. Adv Drug Delivery Rev. 2015; 87:52 –67. doi: 10.1016/j.addr.2015.02.008. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

70. Накасе И., Тадокоро А., Кавабата Н., Такеучи Т., Като Х., Хирамото К., Негиши М., Номидзу М., Сугиура Ю., Футаки С. Биохимия . 2007;46(2):492–501. doi: 10.1021/bi0612824. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

71. Nakase I, Noguchi K, Aoki A, Takatani-nakase T, Fujii I, Futaki S. Sci Rep. 2017; 7:1–12. doi: 10.1038/s41598-017-02014-6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

72. Nakase I, Osaki K, Tanaka G, Utani A, Futaki S. Biochem Biophys Res Commun. 2014; 446: 857–862. doi: 10.1016/j.bbrc.2014.03.018. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

73. Pang H-B, Braun GB, Ruoslahti E. Sci Adv. 2015;1(10):e1500821. doi: 10.1126/sciadv.1500821. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

74. Kawaguchi Y, Tanaka G, Nakase I, Imanishi M, Chiba J, Hatanaka Y, Futaki S. Bioorg Med Chem Lett. 2013;23(13):3738–3740. doi: 10.1016/j.bmcl.2013.05.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

75. Эззат К., Хельмфорс Х., Тудоран О., Юкс С., Линдберг С., Падари К., Эль-Андалусси С., Пуга М., Лангель Ю. FASEB J. 2012;26(3):1172–1180. doi: 10.1096/fj.11-191536. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

76. Helmfors H, Lindberg S, Langel Ü. Методы молекулярной биологии. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США: Springer New York; 2015. Участие SCARA в поглощении наночастиц, образованных проникающими в клетку пептидами; стр. 163–174. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

77. Арукууск П., Пярнасте Л., Маргус Х., Эрикссон Н.К. Дж., Васконселос Л., Падари К., Поога М., Лангель Ю. Биоконъюгат хим. 2013; 24:1721–1732. doi: 10.1021/bc4002757. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

78. Xiang S, Tong H, Shi Q, Fernandes J C, Jin T, Dai K, Zhang X. J Контролируемое высвобождение. 2012; 158:371–378. doi: 10.1016/j.jconrel.2011.09.093. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

79. Haucke V, Kozlov M M. J Cell Sci. 2018; 131:1–10. doi: 10.1242/jcs.216812. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

80. Mettlen M, Chen P-H, Srinivasan S, Danuser G, Schmid S L. Annu Rev Biochem. 2018;87(1):871–896. doi: 10.1146/annurev-biochem-062917-012644. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

81. Smith S M, Baker M, Halebian M, Smith C J. Front Mol Biosci. 2017; 4:1–11. doi: 10.3389/fmolb.2017. 00072. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

82. Kaksonen M, Roux A. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018;19:313–326. doi: 10.1038/nrm.2017.132. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

83. Richard J P, Melikov K, Brooks H, Prevot P, Lebleu B, Chernomordik L V. J Biol Chem. 2005; 280:15300–15306. doi: 10.1074/jbc.m401604200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

84. Veldhoen S, Laufer S D, Trampe A, Restle T. Nucleic Acids Res. 2006; 34: 6561–6573. doi: 10.1093/nar/gkl941. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

85. Laufer S D, Detzer A, Sczakiel G, Restle T. Технологии РНК и их приложения. Берлин, Германия: Springer Berlin; 2010. Избранные стратегии доставки миРНК in vitro и in vivo; стр. 29–58. [CrossRef] [Google Scholar]

86. Kawaguchi Y, Takeuchi T, Kuwata K, Chiba J, Hatanaka Y, Nakase I, Futaki S. Bioconjugate Chem. 2016;27:1119–1130. doi: 10.1021/acs.bioconjchem.6b00082. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

87. Christianson HC, Belting M. Matrix Biol. 2014; 35:51–55. doi: 10.1016/j.matbio.2013.10.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

88. Арукууск П., Пярнасте Л., Осколков Н., Кополовичи Д.М., Маргус Х., Падари К., Мёлль К., Масловская Дж., Тегова Р., Киви Г. и др. Биохим Биофиз Акта, Биомембр. 2013;1828(5):1365–1373. doi: 10.1016/j.bbamem.2013.01.011. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

89. Kiss A L, Botos E. J Cell Mol Med. 2009;13:1228–1237. doi: 10.1111/j.1582-4934.2009.00754.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

90. Nabi I R, Le P U. J Cell Biol. 2003; 161: 673–677. doi: 10.1083/jcb.200302028. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

91. Бранза-Ничита Н., Маковей А., Лазар С. Молекулярная регуляция эндоцитоза. ИнТех; 2012. Зависимый от кавеол эндоцитоз при вирусной инфекции. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

92. Fittipaldi A, Ferrari A, Zoppé M, Arcangeli C, Pellegrini V, Beltram F, Giacca M. J Biol Chem. 2003; 278:34141–34149. doi: 10.1074/jbc.m303045200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

93. Феррари А., Пеллегрини В., Арканджели С., Фиттипальди А., Джакка М., Белтрам Ф. Мол Тер. 2003; 8: 284–294. doi: 10.1016/s1525-0016(03)00122-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

94. Pujals S, Giralt E. Adv Drug Delivery Rev. 2008; 60: 473–484. doi: 10.1016/j.addr.2007.09.012. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

95. Саалик П., Падари К., Нийнеп А., Лоренц А., Хансен М., Йокитало Э., Лангель Ю., Поога М. Bioconjugate Chem. 2009;20(5):877–887. doi: 10.1021/bc800416f. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

96. Rejman J, Oberle V, Zuhorn I S, Hoekstra D. Biochem J. 2004; 377:159–169. doi: 10.1042/bj20031253. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

97. Veiman K-L, Mäger I, Ezzat K, Margus H, Lehto T, Langel K, Kurrikoff K, Arukuusk P, Suhorutšenko J, Padari K, et др. Мол Фармасьютикс. 2013;10(1):199–210. doi: 10.1021/mp3003557. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

98. Taylor B N, Mehta R R, Yamada T, Lekmine F, Christov K, Chakrabarty AM, Green A, Bratescu L, Shilkaitis A, Beattie C W и соавт. Рак рез. 2009; 69: 537–546. doi: 10.1158/0008-5472.can-08-2932. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

99. Mehta R R, Yamada T, Taylor B N, Christov K, King M L, Majumdar D, Lekmine F, Tiruppathi C, Shilkaitis A, Bratescu L, et al. Ангиогенез. 2011;14:355–369. doi: 10.1007/s10456-011-9220-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

100. Hu G, Zheng W, Li A, Mu Y, Shi M, Li T, Zou H, Shao H, Qin A, Ye J. Vet Res. 2018;49:1–9. doi: 10.1186/s13567-018-0513-2. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

101. Kirkham M, Parton R G. Biochim Biophys Acta, Mol Cell Res. 2005; 1745: 273–286. doi: 10.1016/j.bbamcr.2005.06.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

102. Damm E-M, Pelkmans L, Kartenbeck J, Mezzacasa A, Kurzchalia T, Helenius A. J Cell Biol. 2005;168(3):477–488. doi: 10. 1083/jcb.200407113. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

103. Хемалата А., Мэр С. F1000Research. 2019;8:138. doi: 10.12688/f1000research.16549.1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

104. Ye J, Pei X, Cui H, Yu Z, Lee H, Wang J, Wang X, Sun L, He H, Yang VC. J Ind Eng Chem (Амстердам, Нет) 2018; 63: 103–111. doi: 10.1016/j.jiec.2018.02.005. [CrossRef] [Google Scholar]

105. Эразо-Оливерас А., Мутукришнан Н., Бейкер Р., Ван Т.Ю., Пеллуа Дж.П. Фармацевтика. 2012;5(11):1177–1209. doi: 10.3390/ph5111177. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

106. Ян С-Т, Зайцева Е, Черномордик ЛВ, Меликов К. Biophys J. 2010;99(8):2525–2533. doi: 10.1016/j.bpj.2010.08.029. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

107. Эль-Сайед А., Футаки С., Харашима Х. AAPS J. 2009; 11:13–22. doi: 10.1208/s12248-008-9071-2. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

108. Tünnemann G, Ter-Avetisyan G, Martin RM, Stöckl M, Herrmann A, Cardoso MC C. J Pept Sci. 2008; 14: 469–476. doi: 10.1002/psc.968. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

109. Эль-Андалусси С., Йоханссон Х. Дж., Лундберг П., Лангель Ю. Дж Джин Мед. 2006; 8: 1262–1273. doi: 10.1002/jgm.950. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

110. Beloor J, Zeller S, Choi C S, Lee S-K, Kumar P. Ther Delivery. 2015; 6: 491–507. doi: 10.4155/tde.15.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

111. Ло С. Л., Ван С. Биоматериалы. 2008; 29: 2408–2414. doi: 10.1016/j.biomaterials.2008.01.031. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

112. Tünnemann G, Martin R M, Haupt S, Patsch C, Edenhofer F, Cardoso M C. FASEB J. 2006;20:1775–1784. дои: 10.1096/fj.05-5523com. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

113. Maiolo JR, Ferrer M, Ottinger E A. Biochim Biophys Acta, Biomembr. 2005; 1712: 161–172. doi: 10.1016/j.bbamem.2005.04.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

114. Jones A T, Sayers E J. J. Controlled Release. 2012; 161: 582–591. doi: 10.1016/j.jconrel.2012.04.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

115. Hällbrink M, Oehlke J, Papsdorf G, Bienert M. Biochim Biophys Acta, Biomembr. 2004;1667(2):222–228. doi: 10.1016/j.bbamem.2004.10.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

116. Mueller J, Kretzschmar I, Volkmer R, Boisguerin P. Bioconjugate Chem. 2008;19:2363–2374. doi: 10.1021/bc800194e. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

117. Аруффо А. Текущие протоколы в молекулярной биологии. Хобокен, Нью-Джерси, США: John Wiley & Sons, Inc.; 2002. Переходная экспрессия белков с использованием клеток COS. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

118. Глузман Ю. Сот. 1981; 23: 175–182. doi: 10.1016/0092-8674(81)-8. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

119. Jones SW, Christison R, Bundell K, Voyce CJ, Brockbank SMV, Newham P, Lindsay MA. Br J Pharmacol. 2005; 145:1093–1102. doi: 10.1038/sj.bjp.0706279. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

120. Tyagi M, Rusnati M, Presta M, Giacca M. J Biol Chem. 2001; 276:3254–3261. doi: 10.1074/jbc.m006701200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

121. Walrant A, Correia I, Jiao C-Y, Lequin O, Bent E H, Goasdoué N, Lacombe C, Chassaing G, Sagan S, Alves I D. Biochim Biophys Acta, Biomembr . 2011; 1808(1):382–39.3. doi: 10.1016/j.bbamem.2010.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

122. Gronewold A, Horn M, Randjelović I, Tóvári J, Muñoz Vázquez S, Schomäcker K, Neundorf I. ChemMedChem. 2017;12:42–49. doi: 10.1002/cmdc.201600498. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

123. Крозио М.А., Виа М.А., Камара С.И., Манджаротти А., Дель Пополо М.Г., Уилке Н. Биомолекулы. 2019;9(10):625. doi: 10.3390/biom9100625. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

124. Сухоруценко Ю., Осколков Н., Арукууск П., Куррикофф К., Эристе Э., Кополовичи Д-М, Лангель Ю. Биоконъюгат хим. 2011;22(11):2255–2262. doi: 10.1021/bc200293d. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

125. Habault J, Poyet J-L. Молекулы. 2019;24(5):927. doi: 10,3390/молекулы24050927. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

126. Guidotti G, Brambilla L, Rossi D. Trends Pharmacol Sci. 2017; 38: 406–424. doi: 10.1016/j.tips.2017.01.003. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

127. Toro A, Paiva M, Ackerley C, Grunebaum E. Cell Immunol. 2006; 240:107–115. doi: 10.1016/j.cellimm.2006.07.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

128. Торо А., Грюнебаум Э. Дж. Клин Инвест. 2006;116:2717–2726. doi: 10.1172/jci25052. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

129. Широли Д., Гомара М. Дж., Маурици Э., Аткинсон С. Д., Майрс Л., Кристи К. А., Кобис Д. Ф., Маккрадден С. М., Несбит М. А., Аро И. и др. др. Мол Тер-Нуклеиновые Кислоты. 2019;17:891–906. doi: 10.1016/j.omtn.2019.07.017. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

130. Ghatnekar GS, O’Quinn MP, Jourdan LJ, Gurjarpadhye AA, Draughn RL, Gourdie RG. Regener Med. 2009; 4: 205–223. doi: 10.2217/17460751.4.2.205. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

131. Ghatnekar GS, Grek CL, Armstrong DG, Desai SC, Gourdie RG. J Invest Dermatol. 2015; 135: 289–298. doi: 10.1038/jid.2014.318. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Механизм клеточной интернализации и внутриклеточный перенос нитевидных фагов M13, демонстрирующих проникающее в клетку транстело и ТАТ-пептид

. 2012;7(12):e51813.

doi: 10.1371/journal.pone.0051813. Epub 2012 14 декабря.

Аён Ким 1 , Тэ-Хван Шин, Сын-Мин Шин, Чуонг Ди Фам, Донг-Ки Чой, Мён-Хи Квон, Ён-Сун Ким

принадлежность

  • 1 Факультет молекулярной науки и технологии Университета Аджу, Сувон, Корея.
  • PMID: 23251631
  • PMCID: PMC3522607
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0051813

Бесплатная статья ЧВК

Аеунг Ким и др. ПЛОС Один. 2012.

Бесплатная статья ЧВК

. 2012;7(12):e51813.

doi: 10.1371/journal.pone.0051813. Epub 2012 14 декабря.

Авторы

Аён Ким 1 , Тэ-Хван Шин, Сын-Мин Шин, Чуонг Ди Фам, Донг-Ки Чой, Мён-Хи Квон, Ён-Сунг Ким

принадлежность

  • 1 Факультет молекулярной науки и технологии Университета Аджу, Сувон, Корея.
  • PMID: 23251631
  • PMCID: PMC3522607
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0051813

Абстрактный

Сообщалось о клеточной интернализации бактериофага с помощью пептидов, проникающих в клетки на поверхности, хотя основной механизм остается неясным. Здесь мы подробно описываем механизм интернализации, а также внутриклеточный перенос и стабильность нитчатых фагов М13, проникновение которых в клетку опосредуется транстелом транстела 3D8 VL вариабельного домена легкой цепи, проникающим в клетку (3D8 VL-M13) или пептидом ТАТ (TAT). -М13). Рекомбинантные фаги 3D8 VL-M13 и ТАТ-M13 эффективно интернализировались в живые клетки млекопитающих посредством физиологически значимого энергозависимого эндоцитоза и выделялись из клеток в инфекционной форме с более высоким выходом 3D8 VL-M13 (0,005 ≈ 0,01%).

), чем у ТАТ-М13 (0,001 ≈ 0,005%). Биохимические и генетические исследования показали, что 3D8 VL-M13 интернализуется в основном посредством эндоцитоза, опосредованного кавеолами, посредством взаимодействия с протеогликанами гепарансульфата в качестве рецепторов клеточной поверхности, тогда как TAT-M13 интернализуется посредством эндоцитоза, опосредованного клатрином и кавеолами, с использованием протеогликанов хондроитинсульфата в качестве рецепторов клеточной поверхности. рецепторов, предполагая, что интернализация фага происходит по физиологическому эндоцитотическому механизму через специфические рецепторы клеточной поверхности, а не через неспецифические трансцитотические пути. Интернализованные фаги 3D8 VL-M13 направлялись в цитозоль и оставались стабильными в течение более 18 часов без дальнейшего перемещения в другие субклеточные компартменты, тогда как фаги TAT-M13 направлялись в несколько субклеточных компартментов, прежде чем деградировать в лизосомах даже через 2 часа после интернализации. Наши результаты свидетельствуют о том, что механизм интернализации и внутриклеточный перенос нитчатых бактериофагов M13 в значительной степени соответствуют атрибутам представленной проникающей в клетку части. Эффективная интернализация и цитозольная локализация фагов, отображаемых на транстелах 3D8 VL, обеспечит полезный инструмент для внутриклеточной доставки полярных макромолекул, таких как белки, пептиды и миРНК.

Заявление о конфликте интересов

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Цифры

Рисунок 1. Генерация нитевидных фагов М13…

Рисунок 1. Генерация нитевидных фагов M13 с транстелом 3D8 VL, проникающим в клетку (3D8 VL-M13) и…

Рисунок 1. Создание нитевидных фагов M13, демонстрирующих проникающее в клетку транстело 3D8 VL (3D8 VL-M13) и пептид ТАТ (TAT-M13).

В качестве контроля также использовали анти-DR4 hAY4 scFv без способности проникать в клетки; фаговые частицы обозначены как hAY4 scFv-M13. ( A ) Титры фагов, полученные из 100 мл культуральных супернатантов рекомбинантных бактерий, трансформированных фагемидами, путем суперинфекции хелперным фагом VCSM13 в оптимальных условиях культивирования, как описано в тексте. Титры фагов определяли анализом КОЕ. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка. ( баров ошибок ) из 5 независимых экспериментов. ( B ) Вестерн-блот-анализ эффективности отображения слитых белков (вставка-pIII) ( закрашенная стрелка ) по сравнению с полноразмерным pIII ( незакрашенная стрелка ) из хелперного фага VCSM13 на частицах рекомбинантного нитевидного фага M13. Равные титры (10 9 или 10 10 КОЕ) фаговых частиц, приготовленных, как описано в (A), подвергали вестерн-блоттингу с антителом против myc для обнаружения только слитых белков pIII (3D8 VL-pIII и ТАТ-pIII, и hAY4 scFv-pIII) из фагемидных векторов или антитело против M13 pIII для обнаружения как слитых белков pIII из фагемидных векторов, так и полноразмерного pIII из хелперного фага. Положения маркера молекулярного размера указаны. ( C ) Фаговый ИФА на DR4 или ДНК для изучения антигенсвязывающей специфичности рекомбинантных фагов. Различные титры (10 7 ~10 11 КОЕ) рекомбинантных фагов или хелперного фага VCSM13 наносили на каждую лунку, предварительно покрытую указанным антигеном. Связанные фаги выявляли с помощью HRP-конъюгированного анти-М13-антитела. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка. ( погрешностей ) трех независимых экспериментов, проведенных в трех повторностях.

Рисунок 2. Фаги 3D8 ВЛ-М13 и ТАТ-М13…

Рисунок 2. Фаги 3D8 VL-M13 и TAT-M13 энергозависимым образом проникают в живые клетки и…

Рисунок 2. Фаги 3D8 VL-M13 и TAT-M13 проникают в живые клетки энергозависимым образом и в присутствии белков сыворотки и могут быть спасены в своей инфекционной форме пропорционально введенному титру.

Если не указано иное, клетки HeLa (1×10 6 клеток) в бессывороточной среде обрабатывали при 37°C 10 12 КОЕ VCSM13, 3D8 VL-M13 или hAY4 scFv-M13 в течение 6 часов или 10 13 КОЕ ТАТ-М13 на 2 ч. ( A ) Интернализация и субклеточная локализация фаговых частиц в клетках HeLa, необработанных («контроль») или обработанных хелперным фагом VCSM13 или указанными рекомбинантными фагами и проанализированных с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии. Интернализованные фаги выявляли с помощью первичных антител против pVIII и вторичных антител FITC против мыши. Изображения показывают слияние фагов ( зеленый ) и окрашенные DAPI ядра ( синий ) на центральном одиночном конфокальном срезе. ( B ) Влияние титра исходного фага на восстановление интернализированных рекомбинантных фагов. Клетки HeLa инкубировали с 10 10 , 10 11 или 10 12 КОЕ фагов (исходный фаговый титр), тщательно промывали глициновым буфером с низким рН для удаления связанных с поверхностью фагов и лизировали. Бактерии инфицировали клеточными лизатами для определения титра выходного фага с помощью анализа КОЕ. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка. из 3 независимых экспериментов. ( C ) Анализ плазмидной ДНК из выделенных фаговых частиц. Клеточные лизаты, приготовленные, как описано в (В), трансформировали в бактерии, а затем из случайно выбранных двух колоний экстрагировали плазмидную ДНК ( #1 , #2 ). Восстановленную плазмидную ДНК расщепляли с помощью Sfi I для вырезания вставки ДНК [3D8 VL (366 п.н.) или ТАТ (62 п.н.)] перед электрофорезом в агарозном геле и визуализацией путем окрашивания бромистым этидием. «С» обозначает исходный фагемидный вектор, несущий 3D8 VL или ген ТАТ. «М» — маркер размера ДНК. ( D ) Влияние времени инкубации, температуры и присутствия белков сыворотки на интернализацию фагов 3D8 VL-M13 и TAT-M13. Клетки HeLa инкубировали с 3D8 VL-M13 или TAT-M13 в течение указанных периодов ( левых панелей ), при 4°C или 37°C ( средних панелей ) или при 37°C в присутствии или в отсутствие 10% эмбриональная бычья сыворотка (, правые панели ). Интернализованные фаги были количественно определены с помощью анализа КОЕ и представлены как среднее значение ± стандартная ошибка. из 2 независимых экспериментов, как описано в (B), и визуализированных с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии, как описано в (A). На (А) и (Г) увеличение изображения, ×400; масштабная линейка, 5 мкм.

Рисунок 3. 3D8 VL-M13 встроен в…

Рисунок 3. 3D8 VL-M13 интернализуется эндоцитозом, опосредованным кавеолами, тогда как TAT-M13 — опосредованным клатрином и кавеолами…

Рисунок 3. 3D8 VL-M13 интернализуется эндоцитозом, опосредованным кавеолами, тогда как TAT-M13 — эндоцитозом, опосредованным клатрином и кавеолами.

Если не указано иное, клетки HeLa (1×10 6 клеток) в бессывороточной среде обрабатывали при 37°C 10 12 КОЕ 3D8 VL-M13 в течение 6 ч или 10 13 КОЕ ТАТ- М13 на 2 ч. ( A ) Влияние предварительной обработки специфическими ингибиторами эндоцитоза на интернализацию 3D8 VL-M13 или TAT-M13. Клетки HeLa предварительно обрабатывали CPZ (1 мкг/мл), MβCD (5 мМ) или Cyt-D (1 мкг/мл) в течение 30 мин, а затем инкубировали с 3D8 VL-M13 или TAT-M13. Интернализованные фаги визуализировали с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии с использованием первичных антител против pVIII и вторичных антител против TRITC-мыши или количественно определяли с помощью анализа КОЕ и представляли как среднее значение ± стандартная ошибка. ( баров ошибок ) из 3 независимых экспериментов. Изображения показывают слияние фагов (, красный, ) и ядер, окрашенных DAPI (, синий, ), на центральном одиночном конфокальном срезе. ( B ) Совместная локализация интернализированного 3D8 VL-M13 или TAT-M13 с маркерами внутриклеточного эндоцитоза. Клетки совместно обрабатывали в течение 2 ч рекомбинантными фагами и маркерами эндоцитоза, 10 мкг/мл Alexa 488-трансферрина (TF, зеленый ), Alexa 488-холератоксин-B (Ctx-B, зеленый) или FITC-декстрана. (декстран, зеленый), а затем анализировали с помощью конфокальной микроскопии после окрашивания интернализованных фагов (ТРИТЦ, красный ), как описано в (A). На нижних панелях показаны увеличенные изображения рамочной области на верхних панелях. ( C ) Нокдаун клатрина, кавеолина-1 или динамина с помощью специфической миРНК, отслеживаемый вестерн-блоттингом ( левые панели ), и влияние на интернализацию 3D8 VL-M13 и TAT-M13 ( правые панели ) . Клетки HeLa трансфицировали указанной миРНК в течение 48 часов, а затем инкубировали с 3D8 VL-M13 и TAT-M13 перед визуализацией фага с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии, как описано в (A). «Контрольная миРНК» означает скремблированную миРНК, используемую в качестве контроля. На (A–C) увеличение изображения × 400 и масштабная линейка 5 мкм.

Рисунок 4. 3Д8 ВЛ-М13 и ТАТ-М13 в основном…

Рисунок 4. 3D8 ВЛ-М13 и ТАТ-М13 в основном взаимодействуют с HSPG и CSPG соответственно как…

Рисунок 4. 3D8 VL-M13 и TAT-M13 в основном взаимодействуют с HSPG и CSPG соответственно в качестве рецептора клеточной поверхности для клеточной интернализации.

Во всех экспериментах CHO-K1 дикого типа и мутантные клетки (1×10 6 клеток) в бессывороточной среде обрабатывали при 37°C 10 12 КОЕ 3D8 VL-M13 в течение 6 ч или 10 13 КОЕ ТАТ-М13 на 2 ч. ( A ) Влияние присутствия растворимых ГАГ на интернализацию 3D8 VL-M13 и TAT-M13. Клетки CHO-K1 предварительно обрабатывали 100 МЕ/мл гепарина или 50 мкг/мл CS-A, CS-B и CS-C в течение 30 мин, а затем инкубировали с 3D8 VL-M13 или TAT-M13. ( B ) Влияние обработки клеток GAG-лиазами на интернализацию 3D8 VL-M13 и TAT-M13. Клетки CHO-K1 предварительно обрабатывали 5 мМЕ/мл гепариназы III (Hep III) или 20 мМЕ/мл хондроитиназы ABC (Chon ABC) в течение 2 ч при 37°C, а затем инкубировали с 3D8 VL-M13 или ТАТ- М13. ( C ) Интернализация 3D8 VL-M13 и TAT-M13 в мутантные клетки CHO-K1, генетически дефектные в биосинтезе GAG. Клетки CHO-K1 дикого типа, HS-дефицитные pgsD-677 (без HS, в 3 раза больше CS) или HS/CS-дефицитные pgsA-745 (без протеогликанов) инкубировали с 3D8 VL-M13 или TAT-M13. В (A-C) интернализированные фаги визуализировали с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии с использованием первичных антител против pVIII и вторичных антител TRITC-против мыши (A и B, красный ) или FITC-антитела против мыши (C, зеленый ) или определяется количественно с помощью анализа КОЕ и представляется как среднее значение ± стандартная ошибка. ( погрешностей ) трех независимых экспериментов. Увеличение изображения, ×400; масштабная линейка, 5 мкм.

Рисунок 5. Внутренние фаговые маршруты 3D8 VL-M13…

Рисунок 5. Интернализованный фаг 3D8 VL-M13 направляется в цитозоль и остается стабильным без дальнейшего…

Рисунок 5. Интернализованный 3D8 фаг VL-M13 направляется в цитозоль и остается стабильным без дальнейшего перемещения в другие субклеточные компартменты, тогда как фаг TAT-M13 направляется в другие субклеточные компартменты перед быстрой деградацией в лизосоме.

В следующих экспериментах с отслеживанием импульсов клетки HeLa (1×10 6 клеток) в бессывороточной среде обрабатывали при 37°C 10 12 КОЕ 3D8 VL-M13 в течение 2 ч или 10 13 КОЕ ТАТ-М13 на 30 мин. Затем фаги, связанные с поверхностью, удаляли многократными промываниями глициновым буфером с низким pH, а затем отыскивали интернализованные фаги через 0, 2, 6 и 18 часов. ( A ) Внутриклеточная локализация интернализованных фагов во времени была визуализирована с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии, или количество выходных фагов во времени было определено с помощью анализа КОЕ и представлено как среднее значение ± стандартная ошибка. ( погрешностей ) трех независимых экспериментов. ( B ) Внутриклеточный перенос интернализованных фагов во времени, отслеживаемый по совместной локализации с трансферрином (TF, a ), кавеолин-1 ( b ), маркер ранней эндосомы EEA-1 ( c ), трекер поздней эндосомы/лизосомы LysoTracker ( d ), маркер ER калнексин ( e ) или маркер Гольджи Белок Гольджи 58K ( f ), визуализированный с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии. В (A) и (B) интернализированные фаги визуализировали с помощью конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии с первичным антителом против pVIII и вторичным FITC-антимышиным антителом (A и B, a , зеленый 9).0356) или TRITC-антимышиное антитело (B, b-f , зеленый ). На (А) и (Б) увеличение ×400; масштабная линейка, 5 мкм.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

  • Система отбора для изучения взаимодействий белок-РНК: функциональное отображение белка Tat ВИЧ-1 на нитчатом бактериофаге M13.

    Хоффманн С., Уиллболд Д. Хоффманн С. и соавт. Biochem Biophys Res Commun. 1997 27 июня; 235(3):806-11. doi: 10.1006/bbrc.1997.6879. Biochem Biophys Res Commun. 1997. PMID: 9207243

  • Аминокислотная последовательность пептида Tat(48-60) не уникальна по своим свойствам проникать в клетки, а гликозаминогликаны клеточной поверхности ингибируют его клеточное поглощение.

    Субризи А., Туоминен Э., Бункер А., Рог Т., Антопольски М., Уртти А. Субризи А. и др. J Управление выпуском. 2012 10 марта; 158 (2): 277-85. doi: 10.1016/j.jconrel.2011.11.007. Epub 2011 12 ноября. J Управление выпуском. 2012. PMID: 22100438

  • Для интернализации tat ВИЧ-1 требуются гепарансульфатные протеогликаны клеточной поверхности.

    Тьяги М., Руснати М., Преста М., Джакка М. Тьяги М. и др. Дж. Биол. Хим. 2001 г., 2 февраля; 276(5):3254-61. doi: 10.1074/jbc.M006701200. Epub 2000 6 октября. Дж. Биол. Хим. 2001. PMID: 11024024

  • Клеточное поглощение неконъюгированного пептида ТАТ включает клатрин-зависимый эндоцитоз и рецепторы гепарансульфата.

    Ричард Дж.П., Меликов К., Брукс Х. , Прево П., Лебле Б., Черномордик Л.В. Ричард Дж. П. и др. Дж. Биол. Хим. 2005 г., 15 апреля; 280(15):15300-6. doi: 10.1074/jbc.M401604200. Epub 2005 1 февраля. Дж. Биол. Хим. 2005. PMID: 15687490

  • Клеточное поглощение [коррекция поглощения] пептида Tat: механизм эндоцитоза после ионных взаимодействий.

    Вивес Э. Вивес Э. Дж Мол Признать. 2003 г., сен-октябрь; 16(5):265-71. doi: 10.1002/jmr.636. Дж Мол Признать. 2003. PMID: 14523939 Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Бактериофаг лямбда, нацеленный на EGFR, проникает в модельные ткани стромальной и колоректальной карциномы, поглощается клетками карциномы и препятствует формированию трехмерной опухоли.

    Хью Х., Чен Д.В., Фолдвари М., Славцев Р., Блей Дж. Ха Х и др. Фронт Иммунол. 2022 дек 16;13:957233. doi: 10.3389/fimmu.2022.957233. Электронная коллекция 2022. Фронт Иммунол. 2022. PMID: 36591314 Бесплатная статья ЧВК.

  • Неантибиотические стратегии профилактики и лечения интернализированного Staphylococcus aureus .

    Ли Дж, Вен Кью, Гу Ф, Ан Л, Ю Т. Ли Дж. и др. Фронт микробиол. 2022 31 августа; 13:974984. doi: 10.3389/fmicb.2022.974984. Электронная коллекция 2022. Фронт микробиол. 2022. PMID: 36118198 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

  • Модификация бактериофага, нацеленного на опухоль, для потенциального диагностического применения.

    Дымова М.А., Уткин Ю.А. , Дмитриева М.Д., Кулигина Е.В., Рихтер В.А. Дымова М.А. и соавт. Молекулы. 2021 29 октября; 26 (21): 6564. doi: 10,3390/молекулы 26216564. Молекулы. 2021. PMID: 34770973 Бесплатная статья ЧВК.

  • Взаимодействие бактериофагов с организмами животных и человека — вопросы безопасности в свете фаготерапии.

    Подлаха М., Грабовски Л., Кошник-Кавсницка К., Здроевска К., Стасилойч М., Венгжин Г., Венгжин А. Подлача М. и соавт. Int J Mol Sci. 2021 19 августа; 22(16):8937. дои: 10.3390/ijms22168937. Int J Mol Sci. 2021. PMID: 34445641 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

  • Вирусная мимикрия как шаблон дизайна для наноносителей нуклеиновых кислот.

    de la Fuente IF, Sawant SS, Tolentino MQ, Corrigan PM, Rouge JL. де ла Фуэнте И.Ф. и др. Фронт хим. 2021 10 марта; 9:613209. doi: 10.3389/fchem.2021.613209. Электронная коллекция 2021. Фронт хим. 2021. PMID: 33777893 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

использованная литература

    1. Майор С., Пагано Р.Е. (2007)Пути клатрин-независимого эндоцитоза. Nat Rev Mol Cell Biol 8: 603–612. — пабмед
    1. Doherty GJ, McMahon HT (2009)Механизмы эндоцитоза. Анну Рев Биохим 78: 857–902. — пабмед
    1. Foged C, Nielsen HM (2008)Проникающие в клетку пептиды для доставки лекарств через мембранные барьеры. Экспертное заключение «Нарк Делив» 5: 105–117. — пабмед
    1. Маршалл А.Л., Френцель А., Ширрманн Т., Шунгель М., Дубель С. (2011)Нацеливание антител на цитоплазму. MAbs 3: 3–16. — ЧВК — пабмед
    1. Gump JM, Dowdy SF (2007)Трансдукция ТАТ: молекулярный механизм и терапевтические перспективы. Тенденции Мол Мед 13: 443–448.
Leave a Comment on Механизм интериоризации: Интериоризация: примеры механизма, этапы, применениеРазное

About the Author

admin

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Related Posts